厭氧菌在有氧的情況下不能生長(zhǎng)。要培養(yǎng)厭氧菌,必須創(chuàng)造一個(gè)無氧的環(huán)境。通常用加入還原劑的培養(yǎng)基,或用物理、化學(xué)方法去除環(huán)境中的游離氧,以降低氧化還原電勢(shì)。如皰肉培養(yǎng)基、硫基乙酸鈉培養(yǎng)基,牛心腦浸液培養(yǎng)基等。常用的厭氧培養(yǎng)方法有許多,可根據(jù)實(shí)際情況選用。
1.厭氧缸法:接種好標(biāo)本的平板或液體培養(yǎng)基試管,可放入?yún)捬醺變?nèi)培養(yǎng),厭氧缸是普通的干燥缸,用物理化學(xué)的方法使缸內(nèi)造成厭氧環(huán)境,從而將厭氧菌培養(yǎng)出來。
2.厭氧袋:即在塑料袋內(nèi)造成厭氧環(huán)境來培養(yǎng)厭氧菌。塑料袋透明而不透氣,內(nèi)裝氣體發(fā)生管(有NaBH4的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿)、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑。放入已接種好的平板后,盡量擠出袋內(nèi)空氣,然后密封袋口。先折斷氣體發(fā)生管,后折斷美蘭指示劑管,命名袋內(nèi)在半小時(shí)內(nèi)造成無氣環(huán)境。如不突變表示袋內(nèi)已達(dá)厭氧狀態(tài),可以孵育。
3.厭氧盒:原理同厭氧袋,有成品銷售。
4.厭氧培養(yǎng)裝置:用于制造厭氧(氧濃度為0%)、微需氧(氧濃度為6%)和特殊氧氣濃度(1%-18%)比例的厭氧和微需氧環(huán)境,適用于厭氧菌、微需氧菌和細(xì)胞培養(yǎng)等;用于食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB4789要求的空腸彎曲菌,溶血性鏈球菌,雙歧桿菌,乳酸菌和志賀氏菌檢測(cè);還可用于飲用天然礦泉水中的產(chǎn)氣莢膜梭菌等需要厭氧、微需氧及特殊氧氣濃度培養(yǎng)菌的分離培養(yǎng);
HD-AN200型智能厭氧培養(yǎng)裝置用于食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB4789要求的空腸彎曲菌,溶血性鏈球菌,雙歧桿菌,乳酸菌和志賀氏菌檢測(cè);還可用于飲用天然礦泉水中的產(chǎn)氣莢膜梭菌等需要厭氧、微需氧及特殊氧氣濃度培養(yǎng)菌的分離培養(yǎng)。
5.生物耗氧法:在一密閉的容器內(nèi)放以生物(多是植物),消耗氧氣,同時(shí)產(chǎn)生二氧化碳,供細(xì)菌生長(zhǎng)用。
6.焦性末食子酸法:在一潔凈的玻片上鋪上紗布或?yàn)V紙,均勻撒上焦性末食子酸,然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液,迅速將已接種細(xì)菌的平板倒扣在上面,用融化的白蠟封邊,造成一個(gè)封閉空間。焦性末食子酸與堿反應(yīng)后耗氧。該法用于厭氧不嚴(yán)格的厭氧菌的培養(yǎng),簡(jiǎn)單。如有梭狀芽孢桿菌。
7.皰肉培養(yǎng)基:本身就是一個(gè)不需特殊設(shè)備的厭氧培養(yǎng)法。皰肉和肉湯裝入大試管,液面封凡士林,造成無氧環(huán)境